El Fascinante Mundo del Neuropeptido LORF: Desde la Osmorregulación hasta la Toxicidad Viral

El péptido osmorregulador (factor osmorregulador de sanguijuela, LORF; IPEPYVWD) se encontró por primera vez en el sistema nervioso central (SNC) de la sanguijuela. Dado que ciertos péptidos se pueden encontrar tanto en mamíferos como en invertebrados, por ejemplo, los opioides, examinamos cerebros de rata para determinar si LORF estaba presente.

Este péptido se encontró y aisló mediante sucesivos pasos de purificación por HPLC de fase reversa y se caracterizó mediante medición de espectrometría de masas con electrospray. Se secuenció mediante degradación de Edman y se cuantificó en diferentes tejidos mediante ELISA. Nuestros resultados demuestran la presencia de LORF en el hipotálamo, el tálamo y el cuerpo estriado (6 pmol/mg de extracto de proteína) y en otras áreas del cerebro en niveles más bajos.

Este octapéptido también está presente en el duodeno y el hígado de rata (10 a 14 pmol/mg) y en niveles más bajos en el corazón, los pulmones, el páncreas y la médula espinal caudal (< 5 pmol/mg). Los testículos, las glándulas suprarrenales y los riñones tienen los niveles más bajos de todos los tejidos examinados (aprox. 0,5 pmol/mg de proteína). Además, también demostramos que LORF está acoplado a la liberación de óxido nítrico (NO) en el SNC de sanguijuela, el hipotálamo de rata y la vena safena humana de una manera que es inhibida por un inhibidor de la óxido nítrico sintasa, así como por un anticuerpo dirigido hacia LORF.

ORF6 es un gen pequeño que se superpone a los genes de la proteína de movimiento y cubierta de los tobamovirus del subgrupo 1a. La proteína ORF6 del virus del mosaico del tomate (ToMV) cepa L (L-ORF6) interactúa in vitro con el factor de elongación eucariótico 1α, y la mutación del gen ORF6 del virus del mosaico del tabaco (TMV) cepa U1 (U1-ORF6) reduce la patogenicidad in vivo del TMV, mientras que la expresión de este gen de otros dos virus, el virus del crujido del tabaco (TRV) y el virus X de la papa (PVX), aumenta su patogenicidad.

En este trabajo, las propiedades in vivo de las proteínas L-ORF6 y U1-ORF6 se compararon para identificar secuencias que dirigen las proteínas a diferentes ubicaciones subcelulares y también influyen en la patogenicidad del virus. Se hicieron mutaciones específicas del sitio en la proteína ORF6, se crearon proteínas ORF6 híbridas en las que las partes N-terminal y C-terminal se derivaron de las dos proteínas, y se examinaron diferentes subregiones de la proteína, utilizando la expresión ya sea de un vector TRV recombinante o como una fusión de proteína fluorescente amarilla de un plásmido binario en Agrobacterium tumefaciens.

L-ORF6 causó síntomas necróticos leves en Nicotiana benthamiana cuando se expresó a partir de TRV, mientras que U1-ORF6 causó síntomas graves, incluida la muerte del ápice de la planta. La diferencia en los síntomas se asoció con la región C-terminal de L-ORF6, que dirigió la proteína al retículo endoplásmico (ER), mientras que U1-ORF6 se dirigió inicialmente al nucléolo y luego a las mitocondrias.

Se describe un protocolo para seguir el procesamiento de la angiotensina I en angiotensina II por la enzima convertidora de angiotensina (ACE) de conejo y su inhibición por un nuevo antagonista natural, el factor osmorregulador de sanguijuela (LORF) utilizando electroforesis capilar zonal. El experimento se llevó a cabo utilizando el sistema Beckman PACE y se tomaron medidas para determinar (a) los perfiles de migración de la angiotensina y sus péptidos producidos, (b) la cantidad mínima de angiotensina II detectada, (c) el uso de diferentes electrolitos y (d) la concentración de inhibidor.

Demostramos que LORF (IPEPYVWD), un neuropéptido encontrado previamente en el cerebro de la sanguijuela, es capaz de inhibir la ACE de conejo con una IC(50) de 19,8 micro m. Curiosamente, su producto de escisión, IPEP, exhibe una IC(50) de 11,5 micro m. Un ensayo de competencia utilizando p-benzoilglililglicilglicina y ACE de insecto estableció que los fragmentos LORF e IPEP son inhibidores naturales para la ACE de invertebrados. El cincuenta y cuatro por ciento de la actividad de la ACE de insecto se inhibe con 50 micro m IPEP y el 35% de inhibición con LORF (25 mm). La extensión del péptido tanto en el N- como en el C-terminal (GWEIPEPYVWDES) y la escisión de IPEP en IP abolieron la actividad inhibitoria de ambos péptidos.

Los datos inmunocitoquímicos obtenidos con antisueros elevados contra LORF y ACE de sanguijuela mostraron una colocalización entre la enzima y su inhibidor en las mismas neuronas. Caracterización estructural de un nuevo neuropéptido del sistema nervioso central de la sanguijuela Erpobdella octoculata. La purificación de un material inmunorreactivo a un antisuero contra la parte C-terminal de la oxitocina (Pro-Leu-Gly-amida) y presente en el sistema nervioso central de la sanguijuela faringobdellid Erpobdella octoculata se realizó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento en fase reversa combinada con ensayos inmunoenzimáticos y de inmunoligadura de puntos para oxitocina. La secuencia de aminoácidos del péptido purificado (Ile-Pro-Glu-Pro-Tyr-Val-Trp-Asp) se estableció mediante degradación de Edman y se confirmó mediante medición de espectrometría de masas con electrospray. Cuando se inyectan en sanguijuelas, los péptidos purificados o sintéticos ejercen un efecto antidiurético, el más efectivo osciló entre 10 pmol y 1 nmol. Provocaron una absorción de agua 1-2 h después de la inyección. Además, los experimentos electrofisiológicos realizados en la sanguijuela Hirudo medicinalis revelaron una inhibición de la potencia de las conductancias de Na+ de la piel de la sanguijuela por este péptido.

Los estudios inmunocitoquímicos con un antisuero contra la molécula sintética similar a la oxitocina proporcionaron la base citológica para la existencia de un neuropéptido, ya que se detectaron grandes cantidades de neuronas inmunorreactivas en los sistemas nerviosos centrales de E. octoculata. La molécula purificada es diferente a los péptidos de la familia de la oxitocina/vasopresina y es un nuevo neuropéptido en el reino animal. Se denominó factor osmorregulador de sanguijuela (LORF). Una identificación de las proteínas inmunorreactivas a un antisuero contra la oxitocina realizada a nivel de extractos del sistema nervioso central e in vitro productos de ARN traducidos del sistema nervioso central indicó que en los dos casos, se detectó una sola proteína.

El virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi (KSHV) está causalmente relacionado con el sarcoma de Kaposi (KS), el linfoma primario de efusión (PEL) y una proporción de casos de enfermedad de Castleman multicéntrica (MCD). La proteína ORF73 se clonó en pQE80L-orf73 y se expresó en E.coli y se purificó. La ORF73 recombinante expresada se identificó mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE). Se expresó una proteína de aproximadamente 27 kDa como se esperaba. Western Blotting mostró que la ORF73 recombinante purificada reaccionó con suero positivo para KSHV. La inmunogenicidad de la ORF73 recombinante se analizó además mediante ELISA y se determinaron las condiciones óptimas. El ELISA ORF73 se utilizó para comparar la seroprevalencia de KSHV entre las personas Han de Hubei y Xinjiang.

Se describe el desarrollo y la normalización de una edición en español de la Batería de Exámenes de Aptitud General (GATB) del Servicio de Empleo de los Estados Unidos (USES). La nueva edición, llamada Batería de Exámenes de Aptitud General (BEAG), fue diseñada para reemplazar una traducción anterior, el BGPA, preparada para su uso en Puerto Rico.

La localización nasosinusal de la tuberculosis es rara. El propósito de esta investigación, un estudio cualitativo de caso, fue comparar y contrastar el currículo vigente de la Escuela de Optometría de la UIAPR con las competencias y estándares requeridos por las agencias de acreditación y de reválida. Con este propósito, decidimos realizar una revisión y un análisis de documentos: el prontuario de cada uno de los cursos de los currículos implantados en el 1993 y en el 2001; las competencias y estándares establecidos por las agencias de reválida y de acreditación; y las estadísticas en las que se analiza el porcentaje de estudiantes que aprueban cada una de las partes de los exámenes de reválida entre el 1998 al 2003.

Se realizaron entrevistas dirigidas para dar apoyo y complementar la revisión y el análisis de estos documentos. Los participantes de las entrevistas fueron tres estudiantes de la clase de optometría del 2004 (última clase del currículo del 1993); tres estudiantes de la clase de optometría del 2005 (primera clase graduanda del currículo vigente) y tres profesores y/o directores de los Departamentos de Ciencias Básicas, Ciencias Clínicas y Cuidado al Paciente. Esta investigación se enmarcó en el modelo de evaluación curricular de discrepancia de Malcolm Provus y en el modelo de desarrollo basado en competencias. Uno de los hallazgos más importantes del estudio es que los cambios que se implantaron al currículo del 2001 no han logrado que los estudiantes mejoren su ejecución en los exámenes de reválida. Por otro lado, se encontró que el currículo vigente atiende completamente los estándares de la práctica de Optometría, pero no las competencias. Esta información fue validada mediante el uso de una tabla de cotejo para el análisis de los cursos y de la información obtenida de las entrevistas. El estudio determina y concluye que existen discrepancias entre los prontuarios de los cursos del currículo y las competencias requeridas por la agencia de reválida. Segundo, que el Departamento de Ciencias Básicas es el que presenta más deficiencias en el desarrollo de las competencias.

El propósito de este estudio fue doble: (1) determinar si las hormonas gastrointestinales, asociadas con la ingesta de energía y el equilibrio energético, se alteran en mujeres que hacen ejercicio con amenorrea hipotalámica y (2) evaluar la asociación entre las hormonas gastrointestinales y los indicadores conductuales de alimentación desordenada subclínica en mujeres que hacen ejercicio con amenorrea hipotalámica. Este estudio transversal analizó la grelina sérica, el péptido YY (PYY), el péptido-1 similar al glucagón (GLP-1), el estado menstrual (por E1G y PdG), el gasto energético en reposo (REE) y los comportamientos alimentarios subclínicos en mujeres sedentarias ovulatorias (SedOv), mujeres ovulatorias que hacen ejercicio (ExOv) y mujeres amenorreicas que hacen ejercicio (ExAmen). Los grupos fueron similares con respecto a la edad (23,8+/-0,6 años) y el IMC (21,4+/-0,3 kg/m(2)). La relación entre REE y REE predicho (REE:REE predicho) fue de 0,94+/-0,02, 0,94+/-0,02 y 0,88+/-0,02 en los grupos SedOv, ExOv y ExAmen, respectivamente. La REE:REE predicho en el grupo ExAmen fue consistente con una deficiencia energética. LogPYY, grelina, restricción cognitiva dietética y deseo de delgadez se elevaron en el grupo ExAmen en comparación con otros grupos. Las concentraciones de GLP-1 fueron similares entre los grupos. LogPYY se correlacionó con el deseo de delgadez y REE/FFM.

Esta colección de manuales contiene el Examen Provincial de Química de Manitoba para estudiantes que buscan crédito en Química de 4º Año Superior (Química 300) e instrucciones para su uso y calificación. El examen se basa en los Temas Centrales del curso de Química de 4º Año Superior y representa el 30% de la calificación final del estudiante en el curso.

El virus de la influenza aviar (AIV) altamente patógeno del subtipo H5N1 sigue siendo una amenaza para las aves de corral. Las vacunas vectorizadas por el virus de la enteritis del pato (DEV) que expresan la hemaglutinina (HA) del AIV H5N1 pueden ser candidatos viables para vacunas contra el AIV y el DEV. Para facilitar la generación y la mejora adicional de las vacunas HA(H5) vectorizadas por DEV, primero construimos un clon infeccioso de la cepa de vacuna china DEV C-KCE (DEV(C-KCE)). Luego, generamos una vacuna HA(H5) vectorizada por DEV (DEV-H5(UL55)) basada en el cromosoma artificial bacteriano (BAC) insertando un casete de expresión HA(H5) sintetizado con un promotor pMCMV IE y una secuencia HA de consenso en el área no codificante entre UL55 y LORF11. La inmunogenicidad y la eficacia protectora de la vacuna recombinante resultante contra DEV y AIV H5N1 se evaluaron tanto en patos como en pollos. La construcción exitosa de DEV BAC y DEV-H5(UL55) se verificó mediante análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción. El virus recuperado del BAC o los mutantes mostró una cinética de crecimiento similar a la de sus virus parentales. La expresión robusta de HA en fibroblastos de embriones de pollo infectados con la vacuna vectorizada por DEV se confirmó mediante análisis de inmunofluorescencia indirecta y western blotting. Una sola dosis de 10(6) TCID50 de vacuna vectorizada por DEV proporcionó una protección del 100% contra la enteritis viral del pato en patos, y el título de anticuerpos de inhibición de la hemaglutinación (HI) del AIV H5N1 con un pico de 8,2 log2 se detectó en pollos ponedoras de 3 semanas de edad. En contraste, solo se observaron títulos de HI muy débiles en patos inmunizados con 10(7) TCID50 de vacuna vectorizada por DEV. Se observó una tasa de mortalidad del 60% (6/10) en pollos libres de patógenos específicos de 1 semana de edad inoculados con 10(6) TCID50 de vacuna vectorizada por DEV. Demostramos lo siguiente en este estudio. (i) El BAC construido es un clon de genoma completo de DEV(C-KCE). (ii) La inserción de una secuencia de casete de expresión de HA en el área no codificante entre UL55 y LORF11 de DEV(C-KCE) no afecta ni la cinética de crecimiento del virus ni su protección contra DEV. (iii) DEV-H5(UL55) puede generar una fuerte respuesta inmune humoral en pollos de 3 semanas de edad, a pesar de la virulencia de este virus observada en pollos de 1 semana de edad. (iv) DEV-H5(UL55) induce un título de HI débil en patos.

Abundan las contradicciones en la educación superior remedial. Si bien el 40% de los estudiantes universitarios estadounidenses toman cursos de recuperación (Attewell et al., 2006), la recuperación representa solo el uno por ciento del presupuesto nacional de educación superior (Handel & Williams, 2011).

Se describe una técnica que determina algunos elementos importantes en la estructura del grafito, las líneas de dislocación de osme, la presencia de algunas impurezas densas y las disminuciones locales en la densidad, que se desarrollan en el curso de la oxidación.

La localización mamaria del quiste hidático es excepcional. De este hecho, el diagnóstico es difícil antes del examen anatomopatológico. El examen anatomopatológico objetivaba un quiste hidático à localización mamaria. La hidatidosis es una enfermedad ubicuitaria, pudiendo alcanzar todos los órganos. La mayoría de los quistes hidáticos se localizan en el hígado y los pulmones. Los autores reportan en este artículo un nuevo caso de hidatidosis del cordón espermático. El examen anatomopatológico ha concluido à una hidatidosis del cordón espermático.

El Departamento de Educación de Alberta (Canadá) emite "Exámenes de Diploma de Grado 12" para varias disciplinas cada seis meses (fechados en enero y junio de cada año). Excepto por los exámenes de inglés y francés (que se emiten solo en su propio idioma.

En 1760, Diderot se preocupaba por la salud de Sophie Volland: "¿Se encuentra usted bien entonces? ¿Ningún mal en el seno?". Poco después volvía a preguntar: "Hace mucho que no me dice nada del bobo. ¿Ha oído hablar de las píldoras de cicuta? Se les atribuyen prodigios en todas las enfermedades de obstrucción: lobanillos, glándulas congestionadas, tumores cancerosos, etc.". De Francia llegaron al "Journal de médecine" decenas de observaciones que relataban ensayos de tratamiento con el nuevo remedio. Aquí se inscriben en las concepciones generales de la enfermedad, en relación con los debates sobre la oportunidad de la extirpación de los tumores y sobre sus posibles causas: contusión, contaminación, herencia, factores psicológicos.

Tabla resumen de Niveles de LORF en diferentes tejidos de rata

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